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簡(jiǎn)要描述:WSU-HN30人口腔鱗狀細胞 上海復祥生物提供 ATCC 細胞|細胞系|細胞株|腫瘤細胞|細胞|貼壁細胞|懸浮細胞|,細胞庫管理規范,提供的細胞株背景清楚,提供參考文獻和培養條件,網(wǎng)站上有細胞照片,歡迎各位老師咨詢(xún)!
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WSU-HN30人口腔鱗狀細胞
細胞培養說(shuō)明書(shū)
一、細胞培養條件
細胞英文名稱(chēng) | WSU-HN30 | 細胞中文名稱(chēng) | 人口腔鱗狀細胞 |
形態(tài)特性 | 上皮樣 | 生長(cháng)特性 | 貼壁生長(cháng) |
培養體系 | DMEM+10%FBS | ||
傳代方法 | 1:2--1:4傳代 | 傳代情況 | 2~3天1次 |
凍存條件 | 細胞庫無(wú)血清凍存液 | ||
備注 | 收集瓶中培養基,留作過(guò)渡培養。 |
二、細胞收到后處理
細胞在培養瓶中培養至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)*培養液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實(shí)驗室后,先打開(kāi)外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無(wú)菌操作,培養箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀(guān)察:未超過(guò)80%匯合度時(shí),可將瓶裝的*培養液收集至離心管中,加入6ml*培養基,放入37℃、5%CO2孵箱培養;超過(guò)80%匯合度時(shí),根據情況傳代或者凍存,具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養瓶的話(huà),處理完后放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養基,另外一瓶用自己配的*培養基)
三、細胞培養步驟
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶(hù)收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,嚴格無(wú)菌操作;將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿,加入5ml左右*培養基混勻,放入培養箱過(guò)夜培養后查看細胞密度:若密度未超過(guò)80%,換液繼續培養,視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。
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